Thèse Évaluation des Vésicules Extracellulaires pour le Diagnostic et le Traitement d'Une Maladie Rare H/F - Doctorat.Gouv.Fr

Établissement : Université Paris-Saclay GS Santé et médicaments École doctorale : Innovation thérapeutique : du fondamental à l'appliqué Laboratoire de recherche : Institut Galien Paris-Saclay Direction de la thèse : Mariana VARNA-PANNEREC ORCID 0000000261537640 Début de la thèse : 2026-10-01 Date limite de candidature : 2026-07-20T23:59:59 Contexte :
Le syndrome émail-rénal-gingival (ERS) est une maladie rare associée à des allèles pathogènes du gène FAM20A. À ce jour, la maladie ERS progresse inéluctablement, car aucun traitement n'est disponible pour intercepter la malformation maxillaire qui en résulte. La seule option est une chirurgie lourde et douloureuse chez l'adulte. Seule cette intervention permet de poser une prothèse dentaire apportant un certain soulagement aux patients handicapés. De plus, l'histoire naturelle de la maladie n'est pas définie. Les mécanismes conduisant à l'apparition et à la progression de la maladie ne sont pas clairs. Il n'existe aucun outil moléculaire pour le diagnostic et le pronostic.Objectif :
Ce projet de thèse s'inscrit dans le cadre d'un projet de recherche multidisciplinaire financé par l'Agence nationale de la recherche (ANR). Il vise à approfondir la compréhension de la physiopathologie de l'ERS et à mettre en place de nouveaux outils de diagnostic et de traitement basés sur les vésicules extracellulaires (VE). Les VE sont de très petites particules (40-160 nm) entourées d'une bicouche lipidique et transportant une cargaison riche en lipides, protéines, glucides, acides nucléiques (ADN, ARNm et miARN) ainsi que divers facteurs de croissance. Cependant, le rôle fonctionnel des miARN dans la cargaison des VE reste inconnu dans le SRE. La purification et la caractérisation des vésicules extracellulaires restent une étape clé pour leur utilisation comme marqueurs diagnostiques ou comme agents thérapeutiques, ce qui représente aujourd'hui une réelle limitation.

Responsabilités du projet de doctorat :
Le candidat retenu sera basé dans les laboratoires de l'Université Paris-Saclay et de l'Institut Imagine et sera chargé de :
- Comprendre comment produire des vésicules extracellulaires (VE) à partir de cultures de cellules primaires humaines, y compris le maintien et l'expansion des cellules dans des conditions optimisées et contrôlées.
- Isoler et purifier les VE à partir de surnageant de cultures cellulaires à l'aide de diverses méthodes établies telles que l'ultracentrifugation et la chromatographie d'exclusion stérique.
- Caractériser les VE à l'aide de techniques analytiques avancées disponibles en laboratoire, notamment le Western blotting, la diffusion dynamique de la lumière (DLS), la cryo-microscopie électronique à transmission (cryo-TEM) et l'analyse de suivi des nanoparticules (NTA), entre autres.
- Évaluer l'absorption cellulaire des VE in vitro à l'aide de modèles cellulaires appropriés.
- Évaluer la biodistribution in vivo des VE après injection chez la souris.
Le syndrome émail-rénal-gingival (ERS) est une maladie rare associée à des allèles pathogènes du gène FAM20A. À ce jour, la maladie ERS progresse inéluctablement, car aucun traitement n'est disponible pour intercepter la malformation maxillaire qui en résulte. La seule option est une chirurgie lourde et douloureuse chez l'adulte. Seule cette intervention permet de poser une prothèse dentaire apportant un certain soulagement aux patients handicapés. De plus, l'histoire naturelle de la maladie n'est pas définie. Les mécanismes conduisant à l'apparition et à la progression de la maladie ne sont pas clairs. Il n'existe aucun outil moléculaire pour le diagnostic et le pronostic. Approfondir la compréhension de la physiopathologie de l'ERS et mettre en place de nouveaux outils de diagnostic et de traitement basés sur les vésicules extracellulaires (VE). - Obtenir et maintenir des cultures de cellules primaires humaines ;
- Isoler et purifier les VE à partir de surnageant de cultures cellulaires ;
- Caractériser les VE à l'aide de techniques analytiques avancées disponibles en laboratoire, notamment le Western blotting, la diffusion dynamique de la lumière (DLS), la cryo-microscopie électronique à transmission (cryo-TEM) et l'analyse de suivi des nanoparticules (NTA), entre autres ;
- Évaluer le captage cellulaire des VE in vitro ;
- Évaluer la biodistribution in vivo des VE après injection chez la souris.

- Culture cellulaire de base, en particulier culture cellulaire primaire ;
- Connaissance des techniques de purification et des méthodes de caractérisation des EV ;
- Expérience pratique des techniques de biologie cellulaire (par exemple, PCR en temps réel, Western blot, ELISA, microscopie à immunofluorescence, cytométrie en flux) ;
- Fort intérêt pour la recherche pluridisciplinaire ;
- Bonnes compétences en communication et capacité à travailler au sein d'une équipe multidisciplinaire.