Thèse des Anticorps Bispécifiques pour Traiter le Mélanome de l'Ingénierie des Anticorps à l'Évaluation de leur Impact Pharmacodynamique chez la Souris H/F - Doctorat.Gouv.Fr

Établissement : Université de Toulouse École doctorale : BSB - Biologie, Santé, Biotechnologies Laboratoire de recherche : CRCT - Centre de Recherches en Cancérologie de Toulouse Direction de la thèse : Laurence NIETO ORCID 0000000210060168 Début de la thèse : 2026-10-01 Date limite de candidature : 2026-05-15T23:59:59 Bien que les inhibiteurs de points de contrôle immunitaire (ICI) aient révolutionné le traitement des patients atteints de mélanome avancé, nombreux sont ceux qui ne répondent pas à la thérapie ou qui rechutent. Ces inconvénients soulignent la nécessité d'améliorer ces thérapies.
Nous avons récemment identifié une nouvelle voie de résistance aux ICI et démontré que son blocage peut améliorer la réponse à ces traitements dans le mélanome. Cependant, malgré les bénéfices obtenus suite au blocage additionnel de cette voie, des effets indésirables ont été observés avec une augmentation de la fréquence d'hépatites sévères. Dans le cadre de ce projet de thèse, nous souhaitons développer des anticorps bispécifiques (BsAbs) afin d'accroître l'immunité anti-tumorale, en renforçant la spécificité et en minimisant la toxicité de ces traitements. Pour des raisons de confidentialité, nous ne pouvons pas dévoiler par écrit la nature des cibles antigéniques.
L'objectif de ce projet repose sur 3 axes principaux :
i) Produire des BsAbs
Pour générer des BsAbs ciblant simultanément deux antigènes, nous utiliserons une approche de chimie click unique permettant de coupler deux Fab (Fragment antigen-binding region) issus de deux anticorps monoclonaux différents (Szijj et al., Nat Chem. 2023). Brièvement, les fragments Fab seront isolés des anticorps complets correspondants, fonctionnalisés, réassociés par chimie click et purifiés par chromatographie d'exclusion. Leur pureté sera vérifiée par LC-MS (Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry).
La grande modularité de cette technique permet de tester un grand nombre de combinaisons de Fab. En effet, cette méthode est plus rapide, reproductible et moins coûteuse que les méthodes classiques basées sur l'ingénierie des protéines. Elle sera appliquée à des anticorps monoclonaux disponibles en clinique.
ii) Caractérisation des BsAbs in vitro sur des cellules immunitaires et étude de leur biodistribution chez la souris
Nous évaluerons leur spécificité et leur affinité respectivement par étude de leur liaison à des cellules exprimant, ou non, les antigènes cibles et par résonance plasmonique de surface. Leur activité biologique sera évaluée par des tests fonctionnels sur des lymphocytes T activés, comme décrit précédemment (Tocheva et al., Curr Protoc Immunol 2020). La biodistribution des BsAbs marqués à l'Alexa680 sera évaluée par imagerie in vivo (IVIS Spectrum) chez la souris humanisée pour les cibles antigéniques et greffée avec des cellules de mélanome murin. Compte tenu des cibles antigéniques des BsAbs, nous émettons l'hypothèse d'une biodistribution sélective des BsAbs dans la tumeur et dans les organes lymphoïdes secondaires.
iii) Évaluation de l'impact pharmacodynamique, du profil de tolérance et de l'efficacité des BsAbs chez la souris
Afin d'évaluer l'impact pharmacodynamique des BsAbs, nous sélectionnerons les deux meilleurs BsAbs en fonction de leurs propriétés in vitro et de leur biodistribution chez la souris. Nous ferons produire par une CRO (Contract Research Organization, Fairjourney) les deux BsAbs par bioingénierie moléculaire classique permettant une production à grande échelle (100 mg par BsAbs).
Nous évaluerons l'impact pharmacodynamique de nos BsAbs chez des souris humanisées pour les cibles antigéniques et greffées avec des cellules de mélanome. La tolérance sera évaluée tout au long du traitement par mesure du poids corporel et de la formule sanguine, ainsi que par quantification dans le plasma de différents biomarqueurs de toxicité et d'inflammation comme les transaminases hépatiques (ASAT, ALAT), les cytokines pro-inflammatoires (TNF, IL-6, IL1beta) et la protéine C réactive. L'efficacité sera évaluée par la tumorigenèse et l'immunophénotypage par cytométrie spectrale.
Bien que les inhibiteurs de points de contrôle immunitaire (ICI) aient révolutionné le traitement des patients atteints de mélanome avancé, nombreux sont ceux qui ne répondent pas à la thérapie ou qui rechutent. Ces inconvénients soulignent la nécessité d'améliorer les thérapies par ICI. produire de nouveaux anticorps thérapeutiques (anticorps bispécifiques) i) Production des BsAbs.
Brièvement, les fragments Fab seront isolés des anticorps complets correspondants, fonctionnalisés, réassociés par chimie click et purifiés par chromatographie d'exclusion (SEC). Leur pureté sera vérifiée par LC-MS.
ii) Caractérisation in vitro des BsAbs sur des cellules immunitaires (PBMC).
Nous évaluerons leur spécificité, leur affinité et leurs activités biologiques in vitro par résonance plasmonique de surface, en étudiant leur liaison à des cellules exprimant ou non les antigènes cibles. Des tests fonctionnels seront réalisés sur des lymphocytes T activés, comme décrit précédemment (Tocheva et al., Curr Protoc Immunol 2020).

iii) Évaluation de l'impact pharmacodynamique, du profil de tolérance et de l'efficacité des BsAbs chez la souris.
Pour évaluer l'impact pharmacodynamique de nos BsAbs, nous utiliserons des souris humanisées greffées avec des cellules de mélanome. La biodistribution des BsAbs marqués à l'Alexa680 sera évaluée par spectrophotométrie (IVIS Spectrum). La tolérance sera surveillée par le poids corporel, la formule sanguine, les transaminases plasmatiques et l'analyse des cytokines tout au long du traitement. L'efficacité sera évaluée par la tumorigénèse et l'immunophénotypage par cytométrie spectrale.

Nous recherchons un(e) étudiant(e) motivé(e), capable de travailler à la fois de manière autonome et en équipe, avec de bonnes capacités de communication et d'organisation.
Des compétences en immunologie et en oncologie sont attendues. La maîtrise des technologies de cytométrie en flux, microscopie, biologie moléculaire/cellulaire et des connaissances en bioinformatique seraient fortement appréciées. Le candidat doit également être prêt à être formé aux expériences in vivo.